文章摘要:为筛选紫玉兰‘红元宝’（Magnolia liliflora ‘Hongyuanbao’）二次花芽分化阶段稳定表达的内参基因，该文以‘红元宝’不同花芽分化时期的花芽、叶为材料，基于转录组数据，筛选出8个候选内参基因：泛素酶基因（UBC）、肌动蛋白（ACT）、微管蛋白β链（β-TUB）、微管蛋白β-5链（β-TUB5）、微管蛋白α-3链（α-TUB3）、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶（PEPC）、酰基载体蛋白2(ACP2)、酰基载体蛋白3(ACP3)。运用Primer Premier 5设计引物，简单克隆和熔解曲线验证引物特异性；利用qRT-PCR技术检测各个候选内参基因的表达情况，结合GeNorm、NormFinder、BestKeeper软件和RefFinder在线工具综合评估其表达稳定性，并通过目的基因TFL1的表达分析验证其可靠性。结果表明：8个候选内参基因条带位置正确，熔解曲线呈单一峰，说明引物特异性良好；综合4个软件的分析结果发现，β-TUB、β-TUB5和α-TUB3是‘红元宝’不同花芽分化时期较为稳定的内参基因，而UBC和ACT为稳定性最差的内参基因；以单个内参基因和β-TUB5、α-TUB3、β-TUB组合为参照对TFL1基因进行相对表达量分析，结果显示，β-TUB5、α-TUB3、β-TUB及其组合的相对表达量趋于一致，而ACT和UBC并未对目的基因的表达量进行有效的标准化。因此，β-TUB、β-TUB5和α-TUB3可作为‘红元宝’二次花芽分化研究中稳定表达的内参基因。该研究结果将为木兰属植物二次成花分子调控机制研究提供依据。

文章关键词:紫玉兰,内参基因,两次成花,qRT-PCR,微管蛋白基因,

论文作者:董彬^1,2 张超^1,2 张寿洲³ 王亚玲⁴ 

作者单位:1. 浙江农林大学风景园林与建筑学院 3. 仙湖植物园 4. 西安植物园 

论文分类号: S685.15

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