胡蕊艳1王晓桐1李 洁2孟令锴3

1牡丹江医学院药学院 2013 级，黑龙江牡丹江

2牡丹江医学院附属红旗医院血液科，黑龙江牡丹江

3牡丹江医学院天然药物化学与生药学教研室，黑龙江牡丹江

【摘要】目的 建立测定两种金丝桃属药用植物乌腺金丝桃、长柱金丝桃中金丝桃苷的高效液相色谱分析方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为ZorbaxSB-C18柱，流动相为甲醇:乙腈:0.025 mol/L磷酸(10:20:70)，流速1.0 ml/min，检测波长358 nm，柱温30℃。结果 金丝桃苷在0.0062~0.0622 mg范围内，进样量与色谱峰面积呈良好线性关系(r=0.9991);平均回收率为96.41%，RSD=1.27%。结论 该法操作简便、准确、稳定性及重复性好，可用于对长柱金丝桃和乌腺金丝桃中金丝桃苷的含量测定。

【关键词】长柱金丝桃;乌腺金丝桃;金丝桃苷;高效液相色谱法;含量测定

金丝桃属()植物全世界约有400余种，我国有55种，8亚种。黑龙江省分布的金丝桃属植物有两种，分别为乌腺金丝桃( Choisy.)和长柱金丝桃( L.)。近年来，研究表明该属植物的一些种类含有黄酮类、双蒽酮衍生物等化合物，具有抗病毒、抗抑郁的活性[1-2]，其含有的金丝桃素对禽流感病毒(H9亚型)有抑制作用，目前已得到医药界的广泛关注[3]。该属植物含有的黄酮醇、黄烷醇类化合物，尤其金丝桃苷也是该属植物的主要活性成分之一。本实验采用高效液相色谱法(HPLC)对黑龙江省野生金丝桃属长柱金丝桃、乌腺金丝桃药材中金丝桃苷成分进行含量测定并比较分析，为合理开发黑龙江省金丝桃属药用资源提供参考依据。

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仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪(Agilent1100);超声波清洗器(TCQ-250);紫外-可见分光光度计(UV7501);电子天平(BP211D)。

1.2 试药

金丝桃苷对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号:-);乙腈、甲醇为色谱纯，实验用水为自制双蒸水，其余实验试剂为分析纯。乌腺金丝桃、长柱金丝桃采收于2016年4-10月，采收地及采收期见表1，经牡丹江医学院药学院吴兆华教授鉴定。

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方法与结果

2.1 对最大吸收波长的选择

取实验用金丝桃苷对照品溶液进行光谱扫描，实验表明对照品溶液在358 nm波长处有最大吸收，分离效果良好，干扰少，因此，选择检测波长为358 nm。

2.2 流动相的选择

试用多种溶剂系统，最终确定以甲醇:乙腈:0.025 mol/L磷酸(10:20:70)为流动相时金丝桃苷分离效果好，保留时间适宜。

2.3 色谱条件

色谱柱:Zorbax SB-C18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，流动相:甲醇:乙腈:0.025 mol/L磷酸(10:20:70)，流速1.0 ml/min，检测波长为363 nm，柱温:30℃。在此条件下，金丝桃苷能与其他成分很好分开，金丝桃苷的保留时间为5.5 min。色谱图见1-3。

2.4 实验药材中金丝桃苷的提取方法选择

取乌腺金丝桃花期药材4份，每份约0.5 g。分别采用甲醇、乙醇两种溶剂，采用超声提取法进行试验比较，确定提取方法。结果见表2。

2.5 金丝桃苷的HPLC测定

2.5.1 对照品溶液的制备

精密称取金丝桃苷对照品适量，加甲醇溶解于10 ml容量瓶中，制成0.0622 mg/ml的对照品储备液。

2.5.2 标准曲线的绘制

精密吸取上述储备液1.0、2.5、5.0、6.0、7.5、10.0 ml于10 ml量瓶中，加甲醇稀释，进样，按2.3项下色谱条件测定，以对照品浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程:Y=228 38x+66.812，r=0.9991，表明金丝桃苷在0.0062~0.0622 mg范围内线性关系良好。

2.5.3 方法学考察

2.5.3.1 精密度实验

精密吸取对照品储备液10 μl，进样6次，金丝桃苷峰面积RSD=0.54%。结果见表3。

2.5.3.2 稳定性实验