文章摘要:植物螯合肽合成酶（phytochelatin synthase, PCS）催化谷胱甘肽（glutathione, GSH）合成植物螯合肽（phytochelatins, PCs）,在植物重金属解毒方面具有重要作用。苎麻（Boehmeria nivea） PCS1 （命名为BnPCS1）主要在叶片中表达,镉胁迫下表达上调,但其参与苎麻耐受重金属的分子机制尚不明确。本实验对BnPCS1进行了生物信息学分析,构建了苎麻叶片均一化cDNA文库和诱饵载体pGBKT7-BnPCS1,利用酵母双杂交系统进行BnPCS1互作蛋白的筛选。结果显示苎麻BnPCS1是等电点为6.76的不稳定蛋白质和亲水蛋白质,亚细胞定位预测结果表明BnPCS1位于细胞质。苎麻叶片均一化cDNA文库库容是7.12×10⁶ cfu,文库滴度是6.98×10⁶ cfu·mL^-1,均一化程度均大于10⁶。将pGBKT7-BnPCS1诱饵载体转化至Y2HGold酵母菌株检测发现,其无毒性和自激活现象,通过构建的诱饵载体pGBKT7-BnPCS1与苎麻均一化cDNA文库杂交,鉴定出两个BnPCS1的互作蛋白,分别为伴侣蛋白ClpB3和前体mRNA加工因子39。这为进一步研究BnPCS1的功能及分子机制提供了参考依据。

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